荧光显微镜用滤光片是实现荧光成像高对比度、高特异性的核心光学元件,主要作用是精准分离激发光与荧光信号,滤除杂光干扰。 主要类型及功能 - **激发滤光片**:多为带通型,仅允许特定短波长激发光通过(如匹配FITC的490nm左右波段),确保荧光标记物被精准激发。 - **发射滤光片**:常为长波通或带通型,只让荧光物质发射的长波长信号通过(如FITC发射的520nm左右荧光),阻挡未被吸收的激发光。 - **二向色镜(分光镜)**:置于激发光与荧光光路之间,反射短波长激发光至样品,同时透射长波长荧光信号至检测器,实现光路分离。 ### 关键要求 - 高匹配性:中心波长需与荧光染料的激发/发射峰精准对应(如DAPI染料对应350nm激发、460nm发射滤光片)。 - 高透过率:通带内透过率≥90%,保证荧光信号强度。 - 高截止深度:截止波段(如激发光对发射光路的干扰)需≥OD6,大幅降低背景噪声。 ### 应用价值 通过三者协同,荧光显微镜可清晰观察细胞内荧光标记的结构(如细胞核、细胞骨架),广泛用于细胞生物学、病理学等研究,是荧光成像中提升信噪比的关键。